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ELISA試劑盒擁有兩大洗滌方法你可記清楚了

日期:2021-01-27瀏覽:1372次

   ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中AIF水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入AIF抗原、生物素化的抗小鼠AIF抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的AIF呈正相關(guān)。
  洗滌雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
  ELISA試劑盒洗滌的兩大方法:
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
  2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
  4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
  5.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
  二、流水沖洗式
  初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續(xù)沖洗 2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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