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淺看多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法及特點(diǎn)

日期:2022-04-27瀏覽:992次

 
  多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
  多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)的使用方法:
  一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
  1、注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA段作為陽性對(duì)照。
  2、標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
  3、用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
  4、在7號(hào)管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
  5、換槍頭,在6號(hào)管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
  6、換槍頭,在5號(hào)管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
  7、重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
  多態(tài)性試劑盒(PCR-RLFP)具有下列特點(diǎn):
  1、根據(jù)指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
  2、靈敏度比常規(guī)PCR高2-3個(gè)數(shù)量級(jí),可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
  3、即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
  4、一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
  5、本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
  6、本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

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